Un filtru di fluorescenza hè un cumpunente essenziale in u microscopiu di fluorescenza. Un sistema tipicu hà trè filtri basi: un filtru di eccitazione, un filtru di emissioni è un specchiu dicroicu. Sò cumunimenti imballati in un cubu per chì u gruppu hè inseritu inseme in u microscopiu.
Cumu funziona un filtru di fluorescenza?
Filtru di eccitazione
I filtri di eccitazione trasmettenu a luce di una lunghezza d'onda specifica è bloccanu altre lunghezze d'onda. Puderanu esse aduprati per pruduce culori diffirenti sintonizzandu u filtru per permette solu un culore. I filtri di eccitazione sò in dui tipi principali - filtri passaghju longu è filtri passa banda. L'excitatore hè generalmente un filtru passa-banda chì passa solu e lunghezze d'onda assorbite da u fluoroforu, minimizendu cusì l'eccitazione di altre fonti di fluorescenza è bluccà a luce di eccitazione in a banda di emissione di fluorescenza. Comu mostra da a linea blu in a figura, BP hè 460-495, chì significa chì pò passà solu per a fluoriscenza di 460-495nm.
Hè piazzatu in u percorsu di illuminazione di un microscopiu di fluorescenza è filtra tutte e lunghezze d'onda di a fonte di luce eccettu per a gamma di eccitazione fluorofora. A trasmissione minima di filtru dicta a luminosità è a splendore di l'imaghjini. Un minimu di 40% di trasmissione per ogni filtru di eccitazione hè cunsigliatu per chì a trasmissione hè idealmente> 85%. A larghezza di banda di u filtru di eccitazione deve esse interamente in a gamma di eccitazione di fluoroforu cusì chì a lunghezza d'onda centrale (CWL) di u filtru hè u più vicinu pussibule à a lunghezza d'onda di eccitazione di u piccu di u fluoroforu. A densità ottica di u filtru di eccitazione (OD) dicta l'oscurità di l'imagine di fondo; OD hè una misura di quantu un filtru blocca e lunghezze d'onda fora di a gamma di trasmissione o di larghezza di banda. Un OD minimu di 3.0 hè cunsigliatu, ma un OD di 6.0 o più grande hè l'ideale.
Filtru di emissioni
I filtri di emissioni serve à u scopu di permette à a fluorescenza desiderata da a mostra per ghjunghje à u detector. Bloccanu lunghezze d'onda più brevi è anu una trasmissione alta per lunghezze d'onda più lunghe. U tipu di filtru hè ancu assuciatu cù un numeru, per esempiu BA510IF in a figura (filtru di barriera d'interferenza), quella designazione si riferisce à a lunghezza d'onda à u 50% di a so trasmissione massima.
E stesse raccomandazioni per i filtri di eccitazione valenu per i filtri di emissioni: trasmissione minima, larghezza di banda, OD è CWL. Un filtru d'emissione cù a combinazione ideale di CWL, trasmissione minima è OD furnisce l'imaghjini più brillanti pussibuli, cù u bloccu più prufondu pussibule, è assicura a rilevazione di i segnali di emissione più deboli.
Specchio dicroico
U specchiu dicroicu hè situatu trà u filtru di eccitazione è u filtru di emissione à un angolo di 45 ° è riflette u signale di eccitazione versu u fluoroforu mentre trasmette u signale di emissione versu u detector. I filtri dicroici ideali è i splitters di fasciu anu transizzioni sharp trà a massima riflessione è a trasmissione massima, cù una riflessione> 95% per a larghezza di banda di u filtru di eccitazione è una trasmissione di> 90% per a larghezza di banda di u filtru di emissione. Selezziunate u filtru cù a lunghezza d'onda d'intersezzione (λ) di u fluoroforu in mente, per minimizzà a luce diffusa è maximizà u rapportu signal-à-rumore di l'immagine fluorescente.
U specchiu dicroicu in questa figura hè u DM505, chjamatu cusì perchè 505 nanometri hè a lunghezza d'onda à 50% di a trasmissione massima per stu specchiu. A curva di trasmissione per stu specchiu mostra una trasmissione alta sopra 505 nm, una forte caduta di trasmissione à a manca di 505 nanometri, è a riflettività massima à a manca di 505 nanometri, ma pò ancu avè qualchì trasmissione sottu à 505 nm.
Chì ci hè a diffarenza trà filtri passa-longu è passa-banda ?
I filtri di fluorescenza ponu esse divisi in dui tipi: passaghju longu (LP) è passa banda (BP).
I filtri passa-longu trasmettenu lunghezze d'onda lunghe è bloccanu i più brevi. A lunghezza d'onda cut-on hè u valore à u 50% di a trasmissione di punta, è tutte e lunghezze d'onda sopra u cut-on sò trasmesse da i filtri passa-longu. Sò spessu usati in specchi dicroici è filtri di emissioni. I filtri Longpass deve esse usatu quandu l'applicazione richiede una raccolta massima di emissioni è quandu a discriminazione spettrale ùn hè micca desiderata o necessaria, chì hè generalmente u casu per sonde chì generanu una sola spezia emittente in esemplari cù livelli relativamente bassi di autofluorescenza di fondo.
I filtri passa banda trasmettenu solu una certa banda di lunghezza d'onda, è bluccà altri. Reducenu a diafonia permettendu solu a parte più forte di u spettru di emissioni di fluoroforu per esse trasmessa, riduce u rumore di l'autofluorescenza è cusì migliurà u rapportu signale-à-rumore in campioni di autofluorescenza di fondo elevati, chì i filtri di passaghju longu ùn ponu offre.
Quanti tipi di filtri di fluorescenza BestScope pò furnisce?
Certi tipi cumuni di filtri includenu i filtri blu, verdi è ultravioletti. Cum'è mostra in a tavula.
| Set di filtri | Filtru di eccitazione | Specchio dicroico | Filtru di barriera | Lunghezza d'onda di lampada LED | Applicazione |
| B | BP 460-495 | DM505 | BA510 | 485 nm | ·FITC: Metudu di anticorpi fluorescenti ·Acidine orange : DNA, RNA ·Auramine: Bacillus tuberculosi ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM 570 | BA575 | 535 nm | ·Rhodamine, TRITC: Metudu di anticorpi fluorescenti ·Propidium iodure : DNA · RFP |
| U | BP 330-385 | DM410 | BA420 | 365 nm | · Osservazione auto-fluorescenza ·DAPI : colorazione di DNA ·Hoechest 332528, 33342: usatu per a tintura di cromosomi |
| V | BP 400-410 | DM 455 | BA460 | 405 nm | · Catecolamine ·5-idrossitriptamina ·Tetracycline: scheletru, denti |
| R | BP 620-650 | DM660 | BA670-750 | 640 nm | · Cy5 ·Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
I filtri chì sò usati in l'acquiszioni di fluorescenza sò cuncepiti intornu à e lunghezze d'onda maiò utilizzate in l'applicazioni di fluoriscenza, chì si basanu intornu à i fluorofori più usati. Per quessa, sò ancu chjamati dopu à u fluoroforu chì sò destinati à l'imaghjini, cum'è i cubi di filtru DAPI (blu), FITC (verde) o TRITC (rossu).
| Set di filtri | Filtru di eccitazione | Specchio dicroico | Filtru di barriera | Lunghezza d'onda di lampada LED |
| FITC | BP 460-495 | DM505 | BA510-550 | 485 nm |
| DAPI | BP 360-390 | DM 415 | BA435-485 | 365 nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535 nm |
| FL-auramina | BP 470 | DM 480 | BA485 | 450 nm |
| Texas Red | BP 540-580 | DM595 | BA600-660 | 560 nm |
| mCherry | BP 542-582 | DM593 | BA605-675 | 560 nm |
Cumu sceglite un filtru di fluoriscenza?
1. U principiu di selezziunà u filtru di fluoriscenza hè di lascià a lumera fluoriscenza / emissione passà à traversu l'estremità di l'imaghjini quant'è pussibule, è bluccà cumplettamente a luce di eccitazione à u stessu tempu, per ottene u più altu rapportu signal-to-noise. In particulare per l'applicazione di l'eccitazione multifotonica è u microscopiu di riflessione interna tutale, u rumore debule pruvucarà ancu una grande interferenza à l'effettu di l'imaghjini, cusì u requisitu per u rapportu signale à rumore hè più altu.
2. Sapete u spettru di eccitazione è emissione di u fluoroforu. Per custruisce un filtru di fluorescenza chì genera una maghjina d'alta qualità è cuntrastu cù un fondo neru, i filtri di eccitazione è emissioni duveranu ottene una trasmissione elevata cù una ondulazione minima di banda passante nantu à e regioni chì currispondenu à i picchi di eccitazione o emissioni di fluorofori.
3. Cunsiderate a durabilità di i filtri fluoriscenti. Questi filtri deve esse impermeabili à e fonti luminose intense chì generanu luce ultravioletta (UV) chì puderia purtà à "burnout", particularmente di u filtru exciter chì hè sottumessu à a piena intensità di a fonte di illuminazione.
I Diversi Fluorescenti Sample Images
I risorsi sò cullati è urganizati in Internet, è sò usati solu per l'apprendimentu è a cumunicazione. Se ci hè una violazione, per piacè cuntattateci per sguassà.
Tempu di Postu: Dec-09-2022